反相液相色谱柱并非LC-MS/MS分析的主流

LC-MS/MS分析的实用战略和HPLC有很大不同! LC-MS/MS分析的方法的选择性zui重要!

色谱公司不能简单地将现成的反相液相色谱填料装成5cm x 2.1mm短柱充当LC-MS/MS柱使用, 但事实上几乎所有色谱公司都是这样做的。这样的反相液相色谱LC-MS/MS柱有三个明显的弱点:

（1） 许多极性化合物难以保留，质谱灵敏度差。

许多重要的物质，如抗癌药物DTIC, 抗痛药物河豚毒素，污染物质三聚氰胺, 中草药中糖肽等非常极性, 在反相液相色谱柱上没有保留。还有许多的化合物比较极性, 使用少量的甲醇或乙腈就从反相液相色谱柱上洗脱。在药物代谢研究中, 观察到许多化合物自己疏水, 但代谢产物亲水的情况。甲醇或乙腈含量低, 离子化程度低, 质谱灵敏度差。所谓水相C18柱在LC-MS/MS分析中没有价值。

（2） 用常规反相色谱填料装成2.1mm内径的色谱柱在LC-MS/MS和LC/MS应用中常陷入记忆效应（Carryover Effect）的“陷阱”

LC-MS/MS和LC/MS应用中另一个重大问题是记忆效应（Carryover Effect）。记忆效应是指在进样后, 再进一针空白在同样的保留时间仍然观察到化合物峰。记忆效应的副作用是明显的: 它可能人为地增加下一样本的MRM信号, 影响定量分析的精密度和准确度。US FDA Bioanalytical Regulatory Guidances限制zui高校准标准（highest calibration standard） 的记忆效应不能超过20 ％zui低校准标准（lowest calibration standard）MRM信号的20%。

由于大部分色谱公司都使用现成的反相液相色谱填料简单地装成5cm x 2.1mm短柱充当LC-MS/MS柱, 在许多情况下，使记忆效应强, 校准标准曲线范围必须人为缩短, 或不得已在进样后, 再进一针甚至两针空白zui小化记忆效应, 然后进下一个样品。所有这些严重地降低了生产效率。

（3） 峰形拖尾或扭曲

因为活性硅醇基无法* 封闭, 许多碱性化合物在几乎所有色谱公司的反相液相色谱柱上面有明显的峰形拖尾。这种峰形拖尾是记忆效应的一个重要的根源。

另一方面，使用不正确方法过分 封闭致使一些酸性和两性化合物分离效果不佳, 特别是出现峰失真和分裂现象。

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